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          貨號:Cat. No. T130985-10   Size: 10次(試用裝)
          貨號:Cat. No. T130985-100    Size: 100次
          —— 產品介紹
               本產品是可以直接用新鮮的動物、植物、細菌樣品的裂解液進行PCR擴增的試劑盒。
          —— 產品特色
          1. 操作簡單:免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步驟,5分鐘即得用于PCR的模板。
          2. 兼容性廣:可以用于幾乎所有的分子生物學樣品,包括細菌、昆蟲、真菌、各種植物、各種動物、法醫樣品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發、組織樣品、口腔細胞和FTA卡)、石蠟組織切片等。
          3.  提供離心管專用研磨杵,便于處理棘手樣品。
          4. 環保健康:不使用任何有毒有害的試劑。
          5.  尤其適用于大規模育種篩選和臨床篩選。
          6.  本試劑盒可以處理100份不同的樣品,足夠100次PCR實驗。
          —— 操作步驟
          1.  首次使用本產品時需要詳細檢查溶液A和溶液B是否有結晶析出。如果有需要37℃溶解后搖晃均勻待用。未用完部分可以放常溫保存。
          2.  根據材料不同參考下表取少量樣品到1.5 mL塑料離心管中。
           
          樣品種類
          取用量
          動物組織
          1-5 mg
          鼠尾
          2mm長
          血液樣品
          不超過20 uL
          植物葉片
          1-5 mg
          植物種子(去皮)
          1-5 mg
          酵母培養物
          0.2-0.5mL培養物沉淀
          細菌培養物
          0.2-0.5mL培養物沉淀
          注意:未列出樣品,用戶需要自己摸索最佳用量。對富含多醌多酚的植物材料(如棉花),組織使用量最好不要超過0.5mg。
          3.  加入100 uL溶液,確保溶液A完全將樣品淹埋。
          4.  用研磨杵小心將樣品在離心管內搗碎。血液一般搗碎30秒即可;實體組織需要搗碎到溶液的顏色變渾濁(植物葉片的話,溶液的顏色將變成綠色)。對棘手的樣品,還可以增加95℃保溫10-60分鐘這一步驟,待溫度冷卻到室溫后再進入下一步驟。殘留的實體組織碎片不會影響后續試驗。
          5.  加入100uL溶液B,震蕩10秒混勻。
          6.  常溫12000rpm離心2分鐘。
          7.  將上清液轉移到一個干凈的1.5mL離心管中。如果不用,可以放-80℃長期保存。如果用于后續PCR,請直接進入下一步。
          8.  直接用裂解液作為模板設置30 uL體系的PCR反應體系如下:
           
          成分
          用量
          PCR MagicMix3.0
          15uL
          細胞裂解液(來自上一步)
          1-5uL
          自備PCR引物1(10uM)
          1uL
          自備PCR引物2(10uM)
          1uL
          補水到
          30uL
          注意:裂解液體積最好不要超過PCR體積的1/10。如果需要增加模板的加入量,則PCR體系應該相應的增加。如果加入5uL裂解液,則可以使用50uL的PCR體系。
          9.  放入PCR儀中進行PCR, PCR參數需要根據引物Tm值和靶分子長度等參數設置。一般不低于35次循環。
          10.  PCR結束后取5-10 uL直接上樣電泳(本產品不需要上樣液),紅色染料電泳速度相當于50 bp DNA片段。
          注意:
          1.如果反應體系不是30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。
          2.如果細胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA樣品常含此類抑制物),可以在PCR體系中加入1/10的PCR抑制物清除劑,可能會對PCR有幫助。
          ——— 保存條件
               溶液A、溶液B和離心管專用研磨杵可以常溫放置,PCR MagicMix 3.0需要低溫運輸、-20℃保存。有效期1年。
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